通道載玻片--IL-33免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞的免疫熒光實(shí)驗(yàn)是一個(gè)基礎(chǔ)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，傳統(tǒng)的方法是在培養(yǎng)板中放入預(yù)先處理好的蓋玻片，待細(xì)胞貼壁后，使用鑷子將蓋玻片拿出再開始進(jìn)行固定，染色等系列工作。為了簡化這一工作，一系列底部適合直接成像的細(xì)胞耗材應(yīng)運(yùn)而生，如圖：

日本的科研人員在研究細(xì)胞因子IL-33在Ca9-22細(xì)胞中免疫熒光染色試驗(yàn)時(shí)使用了一種通道載玻片。IL-33是一種在內(nèi)皮細(xì)胞中常規(guī)表達(dá)的細(xì)胞因子，其參與調(diào)節(jié)了先天免疫細(xì)胞的Th2 細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。研究人員想研究增強(qiáng)IL-33表達(dá)的牙周內(nèi)皮細(xì)胞中牙周菌Porphyromonas gingivalis所發(fā)揮的作用。研究人員使用牙周菌P.gingivalis刺激Ca9-22細(xì)胞，再測試其中IL-33的表達(dá)。

Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells

H. Tada, T. Matsuyama, T. Nishioka, M. Hagiwara, Y. Kiyoura, H. Shimauchi and K. Matsushita

PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

一）實(shí)驗(yàn)材料：

1）Ca9-22細(xì)胞

2）牙周菌P.gingivalis      50 μg/ml

3）多聚甲醛溶液            4%

4）BSA                    1%PBST溶液

5）藻紅蛋白偶聯(lián)的大鼠抗人IL-33抗體  （clone, 390412; R&D Systems）

6）DAPI

8）六通道載玻片          ibiTreat，德國ibidi公司，80606

圖一：通道載玻片示意圖。細(xì)胞的免疫熒光實(shí)驗(yàn)簡化，并且節(jié)約試劑（單通道30μl），細(xì)胞分布及其均勻，成效效果好。

二）實(shí)驗(yàn)步驟

1）單通道鋪入3×10⁵ Ca9-22細(xì)胞，37℃,5%CO2環(huán)境中孵育過第二天待細(xì)胞貼壁。

2）使用無細(xì)胞培養(yǎng)基，輕輕沖洗通道，移除未貼壁細(xì)胞（圖二）。

圖二：沖洗換液方法，藍(lán)色代表新的無細(xì)胞培養(yǎng)基

3）用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis，（MOI為0.13）加入通道中，刺激Ca9-22細(xì)胞4天

4）用4%的多聚甲醛固定15分鐘

5）用1%BSA的PBST溶液封閉30分鐘

6）使用0.5μg/ml的藻紅蛋白偶聯(lián)的大鼠抗人IL-33抗體4℃孵育1小時(shí)

7）DAPI孵育1分鐘

8）用熒光顯微鏡觀測數(shù)據(jù)。

• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖三：牙周菌P.gingivalis增強(qiáng)牙周內(nèi)皮細(xì)胞中IL-33的表達(dá)。用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis，刺激Ca9-22細(xì)胞后使IL-33（紅色）表達(dá)有顯著的提高。細(xì)胞核（藍(lán)色）