梅里埃試劑API 20E詳解

法國梅里埃公司 API20E 腸道菌試劑鑒定條

上面就是API20E的鑒定試劑條，也就是用來鑒定腸道細菌之用途的。一共是20種生化反應再加手工操作的氧化酶試驗（ARA后面的OX）。非常贊嘆梅里埃公司的厲害，能把非常復雜的生化反應做成那么小的試劑條，而且還做了細菌生化反應數據庫，好龐大的工作量和好精細的工作…………下面我來分別介紹一下這20種生化反應原理以及用途：復雜但是很有趣味……

1）ONPG試驗 翻譯成中文是：鄰硝基苯-半乳糖苷酶試驗。用來檢測細菌是否發酵乳糖。原理是因為乳糖發酵過程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解，但是有些細菌沒有乳糖通透酶，只有半乳糖苷酶，所以會導致遲緩發酵。由此可得，如果某種細菌能夠發酵乳糖，那么一定會產生β－半乳糖苷酶。ONPG試驗是將ONPG作為底物，如果細菌產生β－半乳糖苷酶，那么會水解ONPG為半乳糖和黃色的鄰-硝基苯酚（ONP），培養液會變成黃色。因此試驗結果為陽性。

2）ADH 精氨酸雙水解酶試驗:某些細菌能產生精氨酸水解酶，先水解精氨酸生成瓜氨酸和氨，再水解瓜氨酸生成鳥氨酸、氨和二氧化碳。因此使培養基呈堿性。用于陰溝腸桿菌（陽性）和產氣腸桿菌（陰性）的鑒別。（氨基酸分解過程是在厭氧環境中進行的，所以要加蓋石蠟油造成厭氧環境）。

3）LDC 賴氨酸脫羧酶試驗：某些細菌能產生賴氨酸脫羧酶，可以將賴氨酸脫羧生成胺和二氧化碳，但是堿性更強，使培養基呈紫色（溴甲酚紫指示劑）。用來鑒別用于產氣腸桿菌（陽性）與陰溝腸桿菌（陰性）。

4）ODC 鳥氨酸脫羧酶試驗：某些細菌產生鳥氨酸脫羧酶，將鳥氨酸脫羧生成胺和二氧化碳，是培養基呈堿性。用來鑒別鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和克雷伯菌（陰性）。

5）CIT 檸檬酸鹽（又稱枸櫞酸鹽）利用實驗：當檸檬酸鹽作為的碳源，某些細菌能利用此碳源而分解檸檬酸鹽產生碳酸鹽，而使培養基呈堿性由淺綠色變成深藍色。腸桿菌科中：沙門菌屬、克雷伯菌屬、粘質和液化沙雷菌及某些變形桿菌以及枸櫞酸桿菌陽性；而埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性。

6）H2S 硫化氫實驗：某些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生成硫化氫，遇鉛或亞鐵離子生成黑色硫化物；或者還原培養基中含硫化合物而產生硫化氫，與二價鐵生成黑色的硫化亞鐵，陰性不產生黑色沉淀。腸桿菌科中沙門菌屬、愛德華菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬細菌，絕大多數硫化氫陽性，其它菌屬陰性。

7）URE 尿素酶實驗：某些細菌能產生尿素酶分解尿素，產生大量的氨使培養基變堿。使酚紅指示劑變紅為陽性，不變為陰性。奇異變形桿菌和普通變形桿菌、雷極普羅威登菌和摩根摩根菌陽性，沙門菌、斯氏和產堿普羅威登菌陰性。

8）TDA 苯丙氨酸脫氨酶實驗：某些細菌可產生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸和游離的氨，加入三氯化鐵試劑與苯丙酮酸螯合后產生綠色反應。大量接種被檢菌于苯丙氨酸瓊脂斜面上，35℃培養18~24h，加入10%三氯化鐵試劑出現綠色為陽性。主要用于鑒定變形桿菌屬、摩根菌屬和普羅威登菌屬細菌，均為強陽性，腸桿菌科中其它細菌均為陰性。

9）VP 實驗：測定細菌產生乙酰甲基甲醇的能力。某些細菌如產氣腸桿菌，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸進一步脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性條件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，進而與培養基中的精氨酸等含胍基的物質結合形成紅色化合物。即V-P試驗陽性。所以附加試劑中VP1是強堿性物質（KOH溶液）。

10）GEL 明膠液化實驗：某些具有明教酶（亦稱類蛋白水解酶），蛋白酶的功用在使不能吸收的蛋白質變為可以透入菌體的多肽或氨基酸，這種酶主要為胞外酶，能將明膠先水解為多肽，又進一步水解為氨基酸，失去凝膠性質而液化，讓反應孔內的黑色物質擴散，而呈陽性反應。變形桿菌、芽胞桿菌、梭菌等具有很強的胞外酶的活性。

11）IND 吲哚試驗：某些細菌能夠分解色氨酸生成吲哚，吲哚與試劑中的對二甲氨基苯甲醛生成玫瑰吲哚，變成紅色，為陽性反應。用來檢測細菌分解色氨酸的能力。

12）GLU 葡萄糖發酵試驗：某些細菌發酵葡萄糖，產酸，變黃。

13）MAN 甘露醇發酵試驗：某些細菌發酵甘露醇，產酸，變黃。

14）IND  肌醇發酵試驗：某些細菌發酵肌醇，產酸，變黃。

15）SOR 山梨醇發酵試驗：某些細菌發酵山梨醇，產酸，變黃。

16）RHA 鼠李糖試驗：某些細菌發酵鼠李糖，產酸，變黃。

17）SAC 蔗糖發酵試驗，某些細菌發酵蔗糖，產酸，變黃。

18）MEL 密二糖發酵試驗：某些細菌發酵密二糖，產酸，變黃。

19）AMY 苦杏仁苷發酵試驗：某些細菌發酵苦杏仁苷，產酸，變黃。

20）ARA 阿拉伯糖試驗： 某些細菌發酵阿拉伯糖，產酸，變黃。