<ul id="4oy0o"><tbody id="4oy0o"></tbody></ul>
  • <th id="4oy0o"><menu id="4oy0o"></menu></th>
    產品中心PRODUCTS CENTER
    技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > Tissuelyser-48利用CTAB法在多樣品組織研磨機上提取植物總DNA

    Tissuelyser-48利用CTAB法在多樣品組織研磨機上提取植物總DNA

    更新時間:2024-03-06   更新時間:2024-03-06   點擊次數:3326次
      利用CTAB法在多樣品組織研磨機上提取植物總DNA(以下內容只是簡單介紹,詳細情況,可咨詢本公司,)
      一、實驗試劑:
      1.CTAB抽提液:
      2%(w/v)CTAB
      100mmol/LTris-HCl(pH8.0)
      20mmol/LEDTA(pH8.0)
      1.4mol/LNaCl
      抽提含多酚較多的植物材料時(比如木本植物),上述抽提液中可另加入2%的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)。
      抽提液于室溫保存,可在幾年內保持穩定。臨用之前向裝有上述抽提液的試管中加入約2%-3%(v/v)的β-巰基乙醇。
      2、醋酸鈉:
      3mol/LNaAc
      用冰乙酸調pH值至4.8-5.2。
      3、TE溶液:
      4、其它:
      無水乙醇,異丙醇,75%乙醇,酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),氯仿:異戊醇(24:1),β-巰基乙醇,重蒸水。

    組織研磨

      二、實驗步驟

      1.樣品研磨
      1)取1g的樣品放入2mlepp管中
      2)加入1-2粒5mm研磨珠
      3)加入1ml的CTAB抽提液
      4)將加有樣品的epp管放入多組織研磨儀的適配器中,蓋好
      5)將研磨頻率調到60Hz,設定研磨時間為90秒(可根椐樣品的研磨的難易程度來調節,此數據是以銀杏落葉為樣本得出)
      6)啟動研磨儀對樣品進行研磨(根據不同的樣品,本身性質不同,需要對研磨頻率和研磨時間進行適當的調整)
      2.DNA的粗提
      1)將研磨好的樣品取出于65℃水浴45min,中途間隔(輕柔)振蕩三次混勻
      2)冷卻后加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),輕柔顛倒混勻使乳化10min
      3)7000g-8000g離心10min(18-20℃)
      4)吸取上清于另一干凈的離心管中
      5)(根據需要可用氯仿:異戊醇如上法重復抽提一次,吸取上清)
      6)加入與上清液等體積(且已于-20℃預冷的異丙醇,顛倒混勻,約1至2分鐘后應有白色絮狀沉淀出現(若沒有,則加入上清液1/5至1/10體積的pH4.8-5.2的3MNaAc,混勻,于-20℃冰箱中沉淀30min)
      7)離心法沉淀DNA
      8)在75%乙醇中漂洗DNA數分鐘以上,用Tip頭吸干乙醇
      9)用1ml75%乙醇再漂洗一次
      10)沉淀于室溫或64℃以下的恒溫箱中干燥片刻至剛出現半透明,不要過度干燥
      11)用50μlTE溶解沉淀,可用65℃水浴助溶,DNA粗提物可用于粗略PCR等。

    組織研磨

      3.DNA的純化

      1)向TE溶解的DNA粗提物中入4-10μlRNaseA(約40-100μg)
      2)于37℃酶解RNA1hr或65℃酶解RNA30min以上
      3)加入50μl酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),輕輕顛倒混勻10min
      4)10000g以上常溫離心10min,吸取上清
      5)加入50μl仿氯:異戊醇(24:1)輕輕顛倒10min
      6)10000g以上常溫離心10min,吸取上清(根據需要可重復用氯仿:異戊醇如上法再抽提1-2次,以充分去除蛋白和酚)
      7)向上清中加入1/5-1/10體積的pH4.8-5.2的3MNaAc,并加入2.5倍體積無水乙醇,于-20℃沉淀30min以上
      8)12000g、4℃低溫離心10min,吸干液體
      9)沉淀用75%乙醇漂洗二次
      10)沉淀于室溫或64℃以下恒溫箱中干燥片刻至剛開始出現半透明狀,勿過度干燥加入50μl重蒸水溶解DNA,可于65℃水浴助溶
      11)取5μlDNA電泳檢查DNA的質量
      12)100-500倍稀釋后于分光光度計上測定OD260及OD280,分析DNA的濃度和質量
      13)保存DNA于-20℃
      補充:如果需要提取的樣品比較多(比如1g),研磨好的樣品在后續的提取中,需要轉移到大的epp管中,研磨時可以加入較少的抽提液,研磨完畢按照1g樣品10ml提取液補充抽提液,進行后續的操作。




    主站蜘蛛池模板: 无码人妻久久一区二区三区免费丨| 久久久久无码国产精品不卡 | 制服在线无码专区| 日韩精品无码免费专区午夜不卡| 综合无码一区二区三区四区五区| 亚洲精品天堂无码中文字幕| 无码少妇A片一区二区三区| 内射无码午夜多人| 免费无码成人AV在线播放不卡| 无码乱人伦一区二区亚洲一| 亚洲AV无码精品国产成人| 成在人线av无码免费高潮喷水| 亚洲另类无码专区丝袜| 中文成人无码精品久久久不卡| 影音先锋中文无码一区 | 麻豆AV无码精品一区二区| mm1313亚洲精品无码又大又粗| 亚洲av无码av制服另类专区| 亚洲不卡无码av中文字幕| 一区二区无码免费视频网站| 国产精品免费无遮挡无码永久视频 | 麻豆精品无码国产在线果冻 | 国内精品无码一区二区三区| 在线观看成人无码中文av天堂| 亚洲成av人片在线观看无码不卡| 成人无码视频97免费| 中文字幕丰满乱子伦无码专区| 亚洲国产精品无码中文lv| 成人无码嫩草影院| 中文午夜乱理片无码| 无码毛片一区二区三区中文字幕 | 无码少妇一区二区三区浪潮AV| 小13箩利洗澡无码视频网站| 无码人妻精品一区二区三 | 少妇人妻无码精品视频| 无码国产精品一区二区免费式直播| 亚洲精品自偷自拍无码| 亚洲av麻豆aⅴ无码电影| 国产精品视频一区二区三区无码| 亚洲日韩AV无码一区二区三区人| 国产成人无码免费看片软件 |